膽堿缺乏飼料誘導(dǎo)小鼠肝癌模型

肝癌模型所使用的實驗動物涉及小鼠、大鼠、豚鼠，模型種類主要分為化學(xué)誘導(dǎo)、飲食誘導(dǎo)、移植瘤以及多種方法聯(lián)合使用。本文主要介紹通過化學(xué)和飲食誘導(dǎo)的小鼠模型。

化學(xué)誘導(dǎo)模型

化學(xué)誘導(dǎo)模型的優(yōu)點是與人類的損傷-纖維化-惡性循環(huán)相似。目前發(fā)現(xiàn)的致癌化合物有很多，其主要被分為以下兩種類型: ①遺傳毒性致癌物，直接導(dǎo)致DNA損傷，如二乙基亞硝胺( N-nitrosodiethylamine，DEN) 、黃曲霉毒素 B(Aflatoxin B1， AFB) 、四氯化碳( Carbon tetrachloride ，CCl4) 和硫代乙酰胺(Thioacetamide ，TAA 等; ②非遺傳毒性致癌物，促進(jìn)缺乏直接作用遺傳物質(zhì)的能力，但在由肝毒性化合物引發(fā)后增強(qiáng)腫瘤形成的化合物，如苯巴比妥(phenobarbital，PB) 、過氧化物酶體增生劑(Peroxisome proliferators ，PPs) 等。

飲食誘導(dǎo)模型

通過蛋氨酸膽堿缺乏飼料（MCD）誘導(dǎo)更嚴(yán)重的病變，其特征是1-2周內(nèi)出現(xiàn)急性胰腺炎和8-10周的肝纖維化。為了顯著減少致癌時間，乙硫氨酸（ethionine），一種非蛋白質(zhì)性細(xì)胞毒性甲酸模擬物，可以添加到膽堿缺乏飼料中（CDE），喂養(yǎng)2周就可誘導(dǎo)肝祖細(xì)胞的強(qiáng)烈增殖和肝星狀細(xì)胞的活化，從而引起嚴(yán)重的肝臟炎癥。還有其它方式的飲食誘導(dǎo)，例如西方飲食誘導(dǎo)的肥胖綜合癥模型、非酒精性脂肪肝（NAFLD）動物模型等。

飲食、化學(xué)誘導(dǎo)相關(guān)的工程小鼠

通過改變條調(diào)控肝癌細(xì)胞生長、周期、發(fā)育等進(jìn)展的基因可以誘導(dǎo)腫瘤，例如c-Myc、Wnt/β-catenin、APC、PTEN等?；蚬こ绦∈蟀ńM成型表達(dá)、選擇性表達(dá)、以及誘導(dǎo)性表達(dá)。組成型表達(dá)系統(tǒng)，例如完全整合了乙型肝炎病毒X蛋白HBx基因的轉(zhuǎn)基因小鼠；選擇性表達(dá)系統(tǒng)，例如利用Cre/loxP重組系統(tǒng)構(gòu)建的Alb/c-myc和 MT/TGF-α轉(zhuǎn)基因小鼠；誘導(dǎo)性表達(dá)系統(tǒng)，例如利用四環(huán)素調(diào)控基因表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建的LAP-tTA和TRE-MYC小鼠。

基因工程小鼠飲食+化學(xué)試劑誘導(dǎo)操作方法

LAP-tTA和TRE-MYC小鼠，在去除雙轉(zhuǎn)基因小鼠飲用水中的強(qiáng)力霉素(100μg/ml)后，肝臟MYC表達(dá)被激活；C57BL/6小鼠以20μg/g體重腹腔注射二乙基亞硝基胺(DEN)建立化學(xué)誘導(dǎo)性HCC。12周齡雄性B6.Cg-Lep^ob/J (ob/ob) 小鼠在特定時間喂食蛋氨酸膽堿缺乏飼料（MCD）、膽堿缺乏氨基酸飼料（CDAA）、高脂肪飼料（HF），誘導(dǎo)NAFLD，MCD飼料中添加玉米油(10%)，不添加魚油。改良后的飼料以AIN-76A標(biāo)準(zhǔn)飼料為基礎(chǔ)，熱量等高(4.45千卡/克)，脂肪含量相同(23%)。以不同比例供應(yīng)富含亞油酸的紅花油和含飽和脂肪酸的椰子油，低亞油酸飲食含量為2%，高亞油酸飲食含量為12%。采用高亞油酸或低亞油酸飼喂C57BL/6小鼠4周。

MYC過表達(dá)的小鼠，MCD/CDAA/HF飼料喂養(yǎng)，給予或是不給予DEN喂養(yǎng)。