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    高脂飼料誘導(dǎo)大鼠構(gòu)建NAFLD模型

    非酒精性脂肪肝(NAFLD)包含了一系列的疾病發(fā)展階段,從一般脂肪變性進(jìn)展到脂肪變性與炎癥并發(fā)的非酒精性脂肪肝炎(NASH),隨后進(jìn)展為肝纖維化、肝硬化和肝癌。大多數(shù)肥胖的成年人有脂肪肝型態(tài),他們的患病率達(dá)到30%以上,因此,NAFLD的患病率會(huì)隨著肥胖率的升高而升高。

    為研究NAFLD的發(fā)病機(jī)制并找出治療方法,建立動(dòng)物模型是至關(guān)重要的一步??蒲腥藛T大多利用高脂飼料誘導(dǎo)大鼠建立NAFLD模型,但近幾年建立的NAFLD動(dòng)物模型所采用的高脂飼料配方、建模周期均不一致,在研究方面具有不同的參考價(jià)值。本文對(duì)多種高脂飼料誘導(dǎo)大鼠建立NAFLD模型的方法進(jìn)行總結(jié),如有疑問(wèn),歡迎與我們的技術(shù)團(tuán)隊(duì)討論。

    飼養(yǎng)環(huán)境

    環(huán)境是飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的必要條件之一,對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的成活率有著很大的影響,在相關(guān)論文中對(duì)溫度和濕度幾乎都有詳細(xì)敘述,并強(qiáng)調(diào)了它的重要性??紤]到NAFLD模型對(duì)環(huán)境并無(wú)特殊要求,所以科研人員一般采取了22±2℃,濕度50%-60%,12小時(shí)循環(huán)照明的普通飼養(yǎng)環(huán)境。

    不過(guò)值得注意的是,大鼠對(duì)于環(huán)境的變化很敏感,因此要保證飼養(yǎng)環(huán)境各項(xiàng)指標(biāo)的穩(wěn)定。同時(shí)由于高脂飼料的緣故,大鼠的排泄物異味更重,需要及時(shí)更換墊料,飼料和飲水也需要滅菌處理,以免對(duì)實(shí)驗(yàn)造成不必要的影響。

    實(shí)驗(yàn)大鼠的選擇

    作為實(shí)驗(yàn)的受體,大鼠的選擇十分重要,這不僅關(guān)系到實(shí)驗(yàn)成本,也決定了建模的質(zhì)量及周期。

    清潔級(jí)別

    對(duì)于大鼠的清潔級(jí)別選擇,綜合多篇參考文獻(xiàn),即便使用普通動(dòng)物,對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也沒(méi)有明顯影響,但考慮到降低大鼠死亡率和實(shí)驗(yàn)成本,清潔級(jí)別越高的大鼠無(wú)疑是越好的。

    種類選擇

    對(duì)于實(shí)驗(yàn)大鼠的選擇主要有Wistar大鼠和SD大鼠。其中SD大鼠相對(duì)發(fā)育更快,適應(yīng)能力更強(qiáng),更利于建模;缺點(diǎn)是價(jià)格較高,性格更兇猛。綜合考慮,我們認(rèn)為SD大鼠仍然是更好的選擇,但如果預(yù)算較少也可以選擇前者。

    性別選擇

    在查閱參考的十多篇文獻(xiàn)中,科研人員無(wú)一例外的選擇了雄性大鼠。由于成年的雌性動(dòng)物代謝存在著明顯的周期性,這可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響,所以在大部分實(shí)驗(yàn)中,科研人員更傾向于選擇雄性大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

    體重選擇

    成年大鼠的體重可達(dá)300g,考慮到實(shí)驗(yàn)時(shí)間一般為8-12周,我們認(rèn)為選取5-6周,即120g-200g的大鼠比較合適。值得注意的是,大鼠之間的體重差異必須小于10%,以免引入無(wú)關(guān)的變量,對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成干擾。

    高脂飼料配方

    高脂飼料的配方無(wú)疑是NAFLD建模最關(guān)鍵的因素之一,合適的高脂飼料可以實(shí)現(xiàn)低死亡率低,快速建立模型的目標(biāo)。以下我們將對(duì)于高脂飼料的配方進(jìn)行詳細(xì)探討。

    豬油含量

    豬油含量是高脂飼料的核心,更高的豬油含量可以快速建立NAFLD模型,但會(huì)影響大鼠食欲及死亡率;豬油含量過(guò)低則會(huì)造成建模周期長(zhǎng),癥狀不明顯。在《高脂血癥非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》中,科研人員雖然采用了42%豬油含量的高脂飼料在第8周建模成功,但個(gè)人認(rèn)為并不可取,因?yàn)槿绱烁叩呢i油含量會(huì)大幅度提高大鼠死亡率。我們建議使用10%豬油含量的高脂飼料,可以在12-16周得到癥狀較明顯的NAFLD模型,而且在環(huán)境適宜的情況下,通常不會(huì)有大鼠死亡。如果要縮短建模周期,可以適當(dāng)提高豬油含量,但需要加入其它物質(zhì)來(lái)促進(jìn)吸收。

    其它物質(zhì)

    由于高脂飼料在適口性方面不如常規(guī)飼料,會(huì)導(dǎo)致大鼠采食量下降,在一些實(shí)驗(yàn)中甚至出現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)組大鼠體重低于對(duì)照組的情況。所以很多研究人員在高脂飼料中添加了膽鹽(1%),以提高大鼠食欲,促進(jìn)消化吸收。同時(shí)也可以在飼料中添加膽固醇(1%-5%),以促進(jìn)脂肪肝的形成,縮短建模周期。

    建模周期

    建模周期和許多因素相關(guān),不能一概而論。例如高脂飼料中的豬油含量對(duì)建模周期的影響就非常大。以下我們將討論使用10%豬油含量飼料前提下所需的建模周期。

    在《高脂飲食誘導(dǎo)肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》中,研究人員在8周停止建模,解剖大鼠,表明建模成功,但癥狀較輕,大部分大鼠處于輕度和中度肝炎。而上文提到的研究中,建模時(shí)間長(zhǎng)達(dá)16周,但癥狀明顯,大部分大鼠處于中度和重度肝炎。綜上所述,可以證明12-16周是比較合適的建模周期,具體時(shí)間可結(jié)合需要選擇。

    木棒磨牙

    在《非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型的建立與思考》中,科研人員考慮到高脂飼料質(zhì)地偏軟,所以為實(shí)驗(yàn)組大鼠提供了木棒磨牙,結(jié)果確實(shí)提高了大鼠存活率,體重也是實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組的理想狀況。

    剔除肥胖基因抵抗大鼠

    《高脂飲食誘導(dǎo)肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》一文中探討了肥胖抵抗基因大鼠對(duì)于建立NAFLD模型的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在同樣的飼養(yǎng)條件下,肥胖抵抗基因大鼠的癥狀確實(shí)輕于普通大鼠,這不利于NAFLD模型的建立,所以在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)當(dāng)將其剔除。

    總結(jié)

    高脂飼料誘導(dǎo)大鼠建立NAFLD模型,應(yīng)選擇120-200g的雄性SD大鼠,剔除肥胖抵抗基因大鼠;環(huán)境溫度應(yīng)控制在22℃左右,濕度50%-60%;喂養(yǎng)10%豬油含量的高脂飼料,可添加膽鹽和膽固醇,在12-16周基本可以建模成功。

    本文參考資料來(lái)源:

    1.《高脂血癥非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》劉慶豐/李中東/施孝金著;

    2.《高脂飲食誘導(dǎo)肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》王瑩/王鴻/蔡?hào)|聯(lián)著;

    3.《大鼠非酒精性脂肪肝模型構(gòu)建的方法探討》楊曉紅/徐富翠/余鴻著;

    4.《非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型的建立與思考》王敏/閆曙光著

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