高脂飼料誘導(dǎo)大鼠構(gòu)建NAFLD模型

非酒精性脂肪肝（NAFLD）包含了一系列的疾病發(fā)展階段，從一般脂肪變性進(jìn)展到脂肪變性與炎癥并發(fā)的非酒精性脂肪肝炎（NASH），隨后進(jìn)展為肝纖維化、肝硬化和肝癌。大多數(shù)肥胖的成年人有脂肪肝型態(tài)，他們的患病率達(dá)到30%以上，因此，NAFLD的患病率會(huì)隨著肥胖率的升高而升高。

為研究NAFLD的發(fā)病機(jī)制并找出治療方法，建立動(dòng)物模型是至關(guān)重要的一步?？蒲腥藛T大多利用高脂飼料誘導(dǎo)大鼠建立NAFLD模型，但近幾年建立的NAFLD動(dòng)物模型所采用的高脂飼料配方、建模周期均不一致，在研究方面具有不同的參考價(jià)值。本文對(duì)多種高脂飼料誘導(dǎo)大鼠建立NAFLD模型的方法進(jìn)行總結(jié)，如有疑問(wèn)，歡迎與我們的技術(shù)團(tuán)隊(duì)討論。

飼養(yǎng)環(huán)境

環(huán)境是飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的必要條件之一，對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的成活率有著很大的影響，在相關(guān)論文中對(duì)溫度和濕度幾乎都有詳細(xì)敘述，并強(qiáng)調(diào)了它的重要性?？紤]到NAFLD模型對(duì)環(huán)境并無(wú)特殊要求，所以科研人員一般采取了22±2℃，濕度50%-60%，12小時(shí)循環(huán)照明的普通飼養(yǎng)環(huán)境。

不過(guò)值得注意的是，大鼠對(duì)于環(huán)境的變化很敏感，因此要保證飼養(yǎng)環(huán)境各項(xiàng)指標(biāo)的穩(wěn)定。同時(shí)由于高脂飼料的緣故，大鼠的排泄物異味更重，需要及時(shí)更換墊料，飼料和飲水也需要滅菌處理，以免對(duì)實(shí)驗(yàn)造成不必要的影響。

實(shí)驗(yàn)大鼠的選擇

作為實(shí)驗(yàn)的受體，大鼠的選擇十分重要，這不僅關(guān)系到實(shí)驗(yàn)成本，也決定了建模的質(zhì)量及周期。

清潔級(jí)別

對(duì)于大鼠的清潔級(jí)別選擇，綜合多篇參考文獻(xiàn)，即便使用普通動(dòng)物，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也沒(méi)有明顯影響，但考慮到降低大鼠死亡率和實(shí)驗(yàn)成本，清潔級(jí)別越高的大鼠無(wú)疑是越好的。

種類選擇

對(duì)于實(shí)驗(yàn)大鼠的選擇主要有Wistar大鼠和SD大鼠。其中SD大鼠相對(duì)發(fā)育更快，適應(yīng)能力更強(qiáng)，更利于建模；缺點(diǎn)是價(jià)格較高，性格更兇猛。綜合考慮，我們認(rèn)為SD大鼠仍然是更好的選擇，但如果預(yù)算較少也可以選擇前者。

性別選擇

在查閱參考的十多篇文獻(xiàn)中，科研人員無(wú)一例外的選擇了雄性大鼠。由于成年的雌性動(dòng)物代謝存在著明顯的周期性，這可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響，所以在大部分實(shí)驗(yàn)中，科研人員更傾向于選擇雄性大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

體重選擇

成年大鼠的體重可達(dá)300g，考慮到實(shí)驗(yàn)時(shí)間一般為8-12周，我們認(rèn)為選取5-6周，即120g-200g的大鼠比較合適。值得注意的是，大鼠之間的體重差異必須小于10%，以免引入無(wú)關(guān)的變量，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成干擾。

高脂飼料配方

高脂飼料的配方無(wú)疑是NAFLD建模最關(guān)鍵的因素之一，合適的高脂飼料可以實(shí)現(xiàn)低死亡率低，快速建立模型的目標(biāo)。以下我們將對(duì)于高脂飼料的配方進(jìn)行詳細(xì)探討。

豬油含量

豬油含量是高脂飼料的核心，更高的豬油含量可以快速建立NAFLD模型，但會(huì)影響大鼠食欲及死亡率；豬油含量過(guò)低則會(huì)造成建模周期長(zhǎng)，癥狀不明顯。在《高脂血癥非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》中，科研人員雖然采用了42%豬油含量的高脂飼料在第8周建模成功，但個(gè)人認(rèn)為并不可取，因?yàn)槿绱烁叩呢i油含量會(huì)大幅度提高大鼠死亡率。我們建議使用10%豬油含量的高脂飼料，可以在12-16周得到癥狀較明顯的NAFLD模型，而且在環(huán)境適宜的情況下，通常不會(huì)有大鼠死亡。如果要縮短建模周期，可以適當(dāng)提高豬油含量，但需要加入其它物質(zhì)來(lái)促進(jìn)吸收。

其它物質(zhì)

由于高脂飼料在適口性方面不如常規(guī)飼料，會(huì)導(dǎo)致大鼠采食量下降，在一些實(shí)驗(yàn)中甚至出現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)組大鼠體重低于對(duì)照組的情況。所以很多研究人員在高脂飼料中添加了膽鹽（1%），以提高大鼠食欲，促進(jìn)消化吸收。同時(shí)也可以在飼料中添加膽固醇（1%-5%），以促進(jìn)脂肪肝的形成，縮短建模周期。

建模周期

建模周期和許多因素相關(guān)，不能一概而論。例如高脂飼料中的豬油含量對(duì)建模周期的影響就非常大。以下我們將討論使用10%豬油含量飼料前提下所需的建模周期。

在《高脂飲食誘導(dǎo)肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》中，研究人員在8周停止建模，解剖大鼠，表明建模成功，但癥狀較輕，大部分大鼠處于輕度和中度肝炎。而上文提到的研究中，建模時(shí)間長(zhǎng)達(dá)16周，但癥狀明顯，大部分大鼠處于中度和重度肝炎。綜上所述，可以證明12-16周是比較合適的建模周期，具體時(shí)間可結(jié)合需要選擇。

木棒磨牙

在《非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型的建立與思考》中，科研人員考慮到高脂飼料質(zhì)地偏軟，所以為實(shí)驗(yàn)組大鼠提供了木棒磨牙，結(jié)果確實(shí)提高了大鼠存活率，體重也是實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組的理想狀況。

剔除肥胖基因抵抗大鼠

《高脂飲食誘導(dǎo)肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》一文中探討了肥胖抵抗基因大鼠對(duì)于建立NAFLD模型的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在同樣的飼養(yǎng)條件下，肥胖抵抗基因大鼠的癥狀確實(shí)輕于普通大鼠，這不利于NAFLD模型的建立，所以在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)當(dāng)將其剔除。

總結(jié)

高脂飼料誘導(dǎo)大鼠建立NAFLD模型，應(yīng)選擇120-200g的雄性SD大鼠，剔除肥胖抵抗基因大鼠；環(huán)境溫度應(yīng)控制在22℃左右，濕度50%-60%；喂養(yǎng)10%豬油含量的高脂飼料，可添加膽鹽和膽固醇，在12-16周基本可以建模成功。

本文參考資料來(lái)源：

1.《高脂血癥非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》劉慶豐/李中東/施孝金著；

2.《高脂飲食誘導(dǎo)肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》王瑩/王鴻/蔡?hào)|聯(lián)著；

3.《大鼠非酒精性脂肪肝模型構(gòu)建的方法探討》楊曉紅/徐富翠/余鴻著；

4.《非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型的建立與思考》王敏/閆曙光著