建立這樣的模型,似乎非常簡單,然而,模型建立失敗的情況并不少見,例如,有些研究者自己制作肥胖模型飼料后,發(fā)現(xiàn)動物喂養(yǎng)的動物越來越瘦,而不是逐漸肥胖。
這里有必要談?wù)劮逝帜P偷降自撛鯓訌?fù)制,要注意哪些問題。
用于復(fù)制肥胖模型的動物分為兩類:一類是一般實驗動物,另一類是具有肥胖遺傳背景的動物。一般實驗動物,不論何種,都可以用來復(fù)制肥胖模型,可以根據(jù)你的研究條件和研究需要進(jìn)行選擇。在小鼠中,C57BL/6J是具有遺傳敏感的常用動物,稱為DIO小鼠,對飼料的高熱量很敏感,只要給予高脂飼料就可以肥胖。
(1)熱量和脂肪的控制
凡是使用肥胖模型飼料,在使用飼料時和發(fā)表論文時,都需要說明熱量是多少,脂肪含量是多少,脂肪是什么類型。
此外,高熱量飼料、高脂飼料都是籠統(tǒng)的概念,并不是說熱量越高越好,也不是說脂肪越多越好。
要明白,動物是“因能而食”,意思是,因為需要熱量而飲食,因為熱量滿足而少吃。
對于一般實驗動物來說,要復(fù)制DIO模型,顧名思義,飲食誘導(dǎo)需要一個過程,或者說需要一個時間段,如果熱量過高、脂肪含量過高,動物很難適應(yīng),也就需要更長的時間來誘導(dǎo),甚至還越來越瘦(下面要詳細(xì)介紹)。
高熱量、高脂肪飼料:國際上通行使用的脂肪提供熱量是30%,45%,60%,少數(shù)研究中采用的脂肪熱量高達(dá)70%。
(2)營養(yǎng)素適宜
并不是說只要是高熱量、高脂就行。但是,很多研究者就是這樣片面認(rèn)為的。既然是高熱量、高脂飼料,那么,動物在吃這樣的飼料時,不應(yīng)該發(fā)生營養(yǎng)素缺乏的情況,所以,除了熱量比較高,脂肪比較多,其他營養(yǎng)素必需適宜,否則,復(fù)制出的模型就是高熱量+高脂+營養(yǎng)素缺乏病的模型。
失敗的現(xiàn)象:體重不增加,或者,體重越來 越小。
復(fù)制肥胖模型應(yīng)該很容易成功,不該失敗,但是,還是有不少實驗室還是經(jīng)歷了失敗。不少研究者打電話來詢問:
“我自己制作的飼料,其中加了很多脂肪,喂養(yǎng)的動物為什么越來越瘦?”
“我向某某單位購買的飼料,喂養(yǎng)后越來越瘦?”
“我按照文獻(xiàn)報道中介紹的配方,要求某某飼料廠加工的,為什么動物越來越瘦?”
一般來說,失敗的常見原因有兩方面:
(1)沒有給予適應(yīng)期,或者適應(yīng)期過短
大家都知道,如果某人一餐吃很多紅燒肉,接下來恐怕會消化不良。動物從普通飼料轉(zhuǎn)為高熱量、高脂飼料,需要逐漸過渡,不宜突然完全為高熱量、高脂飼料。不少研究者忽視了這一點,或者雖然重視,但是過于心急,給的適應(yīng)期過短。
(2)使用的飼料有問題
上面已經(jīng)說過,既然是高熱量、高脂飼料,那么,營養(yǎng)素是不能缺的。如果某種或者某些營養(yǎng)素缺乏,會影響食物的食欲、消化、吸收或代謝,結(jié)果是食量越來越少,或者說,熱量上不去,怎么會肥胖?
這里介紹由國家食品藥品監(jiān)督管在2012年4月23頒布的保健功能評價方法中關(guān)于減肥功能評價方法的模型。
模型方法:使用體重200±20g的雄性大鼠,在適應(yīng)期后喂養(yǎng)高熱量飼料:“在維持飼料中添加15.0%蔗糖、15.0%豬油,適量的酪蛋白、磷酸氫鈣、石粉等。除了粗脂肪外,模型飼料的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、粗灰分、鈣、磷、鈣:磷均要達(dá)到維持飼料的國家標(biāo)準(zhǔn)?!?/p>
所以,各位同學(xué)老師,在定制造模飼料的時候,可以先向我們廠方的業(yè)務(wù)/技術(shù)人員說明您需要造哪種模型,用的是什么種類的實驗動物,實驗周期為多久等等內(nèi)容,我們的技術(shù)人員會根據(jù)您的需求,提供適合您需求的配方給您。
]]>動脈粥樣硬化模型就是在實驗動物身上,通過人為的引導(dǎo)干預(yù)來模仿人類動脈粥樣硬化的特點,主要分為兩點,一是動脈硬化,二是形成斑塊。
一般情況下,動脈硬化比較容易實現(xiàn),但是否有斑塊、斑塊什么樣、斑塊發(fā)生的部位,這些往往與人類的動脈粥樣硬化斑塊有很大的差別,因此,應(yīng)當(dāng)特別注意動物的選擇。
二、動脈粥樣硬化模型動物選擇
1、大鼠、小鼠:很難形成,主要原因是這些動物對飼料中膽固醇的吸收率低,僅為40%左右,對血脂的清除能力高。
2、兔、猴、豬:容易形成,其中采用實驗兔造模,形成的斑塊與人體的相差較大,比較接近人的并且能夠形成斑塊的,是雞、鴿子、地鼠、猴和豬,因此可以用這些動物來構(gòu)建。
3、轉(zhuǎn)基因小鼠:很容易形成,ApoE KO或LDL-R NULL基因改造小鼠,對膳食中的膽固醇含量特別敏感。
三、飼料選擇及復(fù)制方法
1、C57BL/6小鼠:高脂、高膽固醇,添加膽酸的飼料,或添加抗甲狀腺藥物的飼料
造模時間:無法準(zhǔn)確確定。
2、C57BL/6J小鼠:高膽固醇、膽酸
造模時間:14周左右
3、大鼠:高脂、高膽固醇,添加膽酸的飼料,或者添加抗甲狀腺藥物飼料
造模時間:時間不確定,不一定能形成斑塊
4、兔:高膽固醇、高脂高膽固醇、高蛋黃粉等
造模時間:8-10周
5、黃金地鼠:高脂、高膽固醇。
造模時間:6周左右,形成部位與人體的動脈粥樣硬化相似
6、鴿子:高脂、高膽固醇飼料,或者添加甲基硫氧嘧啶的飼料。
造模時間:病變發(fā)生較快
7、猴:高脂、高膽固醇飼料。
造模時間:需要1~3個月
8、豬:高脂、高膽固醇飼料。
造模時間:需要9個月以上
]]>② 實驗設(shè)計需要加大樣品量,根據(jù)每天動物采食量,淘汰食量多或者少的個體,利用日采食量接近的群體作為實驗數(shù)據(jù)組
③ 控制實驗組和對照組采食量,不能自由采食,根據(jù)統(tǒng)計食量每天更換飼料
④ 極端情況下可一只動物一籠,工作會加大但控制更精準(zhǔn)
]]>眾所周知高鈉(高鹽)飲食是引起高血壓的主要因素,但其他因素,如微量元素缺乏、氨基酸缺乏、維生素缺乏、低蛋白等飲食也可以出現(xiàn)高血壓癥狀,此外,高脂高糖高蛋白引起的肥胖、代謝綜合征、高尿酸血癥等疾病同樣可能誘發(fā)高血壓。
因此研究者必須明確研究的方向,不能只關(guān)注飲食中鈉的含量,而忽視其他營養(yǎng)成分,這樣實驗干擾項多,實驗效果難以預(yù)估。
那么如何選擇飼料以及建模需要注意哪些方面呢?
1、飼料選擇:實驗組必然選擇高鈉(鹽)飼料無疑,對照組飼料鈉含量的控制非常關(guān)鍵,普通日糧飼料鹽含量若是超標(biāo),兩組血壓差異不明顯,很難達(dá)到預(yù)期。建議采用國際標(biāo)準(zhǔn)純化料飲食AIN-93系列,鈉含量可以精準(zhǔn)控制在一定范圍內(nèi)。
2、血壓測量:一般方式為測量動物尾血壓,這種常常得到是收縮壓,但我們?nèi)祟愂且允鎻垑鹤鳛樵\斷依據(jù)的,顯然測量收縮壓作為高血壓是否成型的依據(jù)是不合理的。
同時:血壓測量過程中干擾因素很多,如:測量的時間、測量的環(huán)境、測量的設(shè)備等,所以必須通過控制這些來提高測量準(zhǔn)確性和可靠性。
3、建模周期:需要注意的是更換高鈉飲食后,由于飲食結(jié)構(gòu)突然改變動物血壓會短期內(nèi)升高一些,但適應(yīng)期后很快趨于穩(wěn)定,所以短期血壓升高不能判斷為高血壓建模成功,應(yīng)該盡可能的延長觀察時間。
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